Description Descrizione:
The mirror-image phage display library screening methodology is an innovative approach in drug discovery which ultimately led to the identification of metabolically stable peptide molecules as binders of a protein target. In mirror-image phage display, the D-enantiomer form of the protein target, that is the mirror-image conformation of the natural protein, is used as bait in libraries screening experiments leading to the selection of L-peptide binders, which, when inverted in their D-form, for symmetry, are able to bind the native L-protein target. A mirror protein can only be prepared by chemical route, using chemical ligation approaches. We apply mirror-image phage display to the selection of D-peptide binders of Axl receptor, a novel interesting protein target in biomedicine. To this aim we set up the chemical procedure for the total chemical synthesis of the extracellular domains of Axl receptor, such as Ig2 domain, in their mirror form and we use such proteins in library screening experiments. La tecnologia del mirror-image phage display rappresenta un approccio innovativo nel campo del drug discovery che consente l’identificazione di molecole peptidiche metabolicamente stabili come potenziali ligandi di un target proteico. Nel mirror-image phage display, la forma enantiomerica D della proteina target, ovvero la conformazione speculare a quella della proteina naturale, è impiegata come esca in esperimenti di screening di una libreria fagica di peptidi, consentendo di selezionare ligandi peptidici in forma L che, una volta sintetizzati nella loro forma enantiomerica D, per questioni di simmetria, sono capaci di legare la forma nativa L della proteina target. Una proteina mirror, cioè nella forma enantiomerica D, può essere preparata solo per via chimica, usando D-amminoacidi e approcci di chemical ligation. Abbiamo applicato la tecnologia del mirror-image phage display alla selezione di D-peptidi in grado di legare il recettore Axl, un target molecolare di grande interesse biomedico. A tale scopo, abbiamo messo a punto la procedura chimica per la sintesi di domini extracellulari del recettore Axl nella loro forma enantiomerica D, come il dominio immunoglobulinico Ig2. Tali mirror proteins sono state poi impiegate in esperimenti di screening di librerie fagiche di peptidi.